将所需意图基因构建入载体，加上恰当的调控序列，转入动物胚胎细胞，使转基因动物排泄的乳汁中含有所需求药用蛋白。从交融基因转入胚胎细胞到搜集蛋白质有一个进程，包含胚胎植入、临产和转基因动物的成长。转基因动物从出世到第一次泌乳，猪、羊、牛各需12、14、16个月；而且只要雌性动物泌乳且不接连，一般可继续2、6、10个月。牛、羊等大型牲畜能对药用蛋白进行正确的后加工，使之具有较高的生物活性，一起产奶量大，易于大规模出产，因而成为乳腺生物反应器抱负的动物类型。

  第一个进入临床试验的转基因蛋白产品是抗凝血酶Ⅲ，将半乳糖β-酪蛋白的启动子和含抗凝血酶Ⅲ基因序列相连，转入绵羊胚胎细胞，在转基因绵羊的乳液中得到有生物活性的蛋白产值可达7g/L。现在该蛋白正用于冠状动脉旁路手术患者的二期临床验证。

  在试验进程中人们发现牛的β-乳球蛋白（BLG）基因很安稳，并能在乳腺中特异性表达。Hyttinen等将含有5端2.8kb和3端1.9kb的牛BLG基因片段构建成载体，转入小鼠胚胎细胞，可在转基因小鼠的乳腺中特异表达高水平的BLG，此外，还发现CpG位点的甲基化程度与BLG的表达量有关，甲基化少的转基因小鼠乳液中BLG排泄量较大，可达1～2mg/ml，而其他转基因小鼠排泄量小于0.1mg/ml。

  （EPO） 现在国内外均选用CHO细胞表达出产人EPO，本钱比较贵重，而用转基因动物出产的EPO，可能是一条抱负的途径。将EPO dNA别离以HindⅢ和BamHI酶切，1%琼脂糖凝胶电泳收回5.4kb的HinⅢ/BamHI片段，刺进pGEM-7zf(+）载体，再将867bp的BLG启动子刺进EPO基因之前EcoR、ClaI位点，构建表达载体pGEM-3zf(+）β-LG-EPO。通过显微打针办法得到转基因小鼠乳汗中的EPO含量可达0.5μg/ml。α1-抗胰蛋白酶这也是一个使用BLG基因构建的重组蛋白。将BLG5结尾4.0kb序列与人的α1-抗胰蛋白酶（α1AT）基因的6.5kb片段（去掉第一个内含子）交融，再衔接羊的BLG启动子，以pPOLYⅢ-Ⅰ为载体，转入羊的胚胎细胞，可在转基因羊排泄的乳液中得到含量高达60.0mg/ml的重组蛋白α1AT。转基因在两年行进入了临床验证。

  Schnieke等将羊的BLG基因5结尾和人的因子Ⅸ cDNA 与含有BLG仿制单元和3结尾的片段交融，将构建的杂合基因转入羊的胚胎细胞，从排泄的乳汁中得到125μg/ml的重组蛋白。黄淑帧教授等构建了一个含有小鼠MAR元件、牛β-酪蛋白基因调控序列和hFⅨ微基因的hFⅨ乳腺安排特异性表达载体pMCⅨm，其间hF Ⅸ微基因包含全长hF Ⅸ cDNA ，800bp通过改造的内含子1序列和hFⅨ蛋白的信号肽序列。将线形化的表达载体pMC Ⅸm导入羊的受精卵。转基因羊排泄的乳汁中hFⅨ蛋白的含量约为95ng/ml。在另一试验中，Yull等将BLG5结尾序列，fⅨ编码序列和缺失隐性3端衔接点的f Ⅸ3结尾不翻译区域的一个小片段交融，构成杂合基因，去掉SphI和SmaI位点，克隆入移去了pBJ41的SphI/EcoRV。转入小鼠胚胎细胞，得到的重组蛋白产值达0.06mg/ml。通过进一步研讨，发现是转基因动物乳腺中对DNA的过错剪切使排泄量下降，然后增高重组蛋白产率。在乳腺安排中表达有彻底活性的因子Ⅸ是比较成功的，尤其是乳腺安排对因子Ⅸ N端邻近的一段含12个葡萄糖残基的序列进行γ-羧化以坚持其活性，而在曾经的天然蛋白中未曾发现γ-羧化效果。

  人FⅧcDNA长约7.2kb，是现在为止表达的最长cDNA。将它刺进小鼠的乳清酸性蛋白（WAP）基因中启动子（2.5kb）的下流，使之在乳腺中靶向排泄FⅧ重组蛋白。在WAP/FⅧcDNA构建的转基因小鼠中rFⅧ表达最低，而在转基因猪中可达1.0～2.7μg/ml。

  Castilla等将编码了重组单克降抗体（rMab）6A.C3的免疫球蛋白基因cDNA刺进小鼠WAP dNA基因组的第一个外显子，使rMab 6A.C3的表达能够由WAP基因调控序列来操控，将构建的杂合基因注入小鼠胚胎细胞原核，使小鼠乳腺排泄有活性的单克降抗体，这种转基因表达产品将大范围的应用于防备新生儿肠道感染。

  同样在WAP基因的第一个外显子位点，Drews等将人C蛋白cDNA刺进，转入小鼠胚胎细胞，可得到产值达1.6mg/ml的重组蛋白。而将上述杂合基因转入猪的胚胎细胞，可使猪排泄出380μg/mlμg/ml·hr的外源蛋白，活性与人血浆中C蛋白的活性相同。因为C蛋白的抗凝活性依赖于轻链膜结合区域正确的γ-羧化，因而，转基因猪能排泄有活性的C蛋白标明猪的乳腺细胞可对C蛋白前体高速率地进行γ-羧化，以使老练C蛋白有完好的活性。

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